幽门螺杆菌重组粘附素rHpaA生物学活性及免疫原性的体外评价

目的：体外评价幽门螺杆菌（Hp)重组粘附素rHpaA的生物学活性及免疫原性,探讨其在Hp疫苗应用中的可行性。方法：流式细胞术和光镜定量计数法检测rHpaA及其抗体对Hp与胃上皮细胞粘附的影响;ELISA法测定Hp感染者血清中抗HpaA抗体,^3H-TDR掺入法测定人外周血淋巴细胞（PBL）对rHpaA的增殖反应,评价rHpaA对体液和细胞免疫的细胞;流式细胞术检测rHpaA对T辅助细胞（Th）表型的选择作用,探讨rHpaA可能的免疫机制。结果rHpaA和抗rHpaA抗血清均能部分阻断Hp与胃上皮细胞系的粘附;ELISA法能检测出Hp阳性患者血清中存在抗HpaA抗体,检测出率与Hp超声破碎抗原（HpSON)包被下的检出率相近（50%vs54%,P＞0．05）;不论培养基中是否加入IL－2,rHpaA均可刺激Hp PBL的增殖（P＜0．05）;Hp阳性或阴性PBL细胞与rHpaA孵育后均能显著提高IL－4阳性T细胞比例（P＜0．05）。结论HpaA是具有免疫原性的Hp菌体成分,且能选择性增加Th2细胞比例,有望成为Hp疫苗研制中一种有效的新抗原。     

原核表达的PD-1与PD-L1融合蛋白相互作用分析

目的 分析经原核表达纯化的PD-1和PD-L1融合蛋白分子间相互作用力及其生物学活性.方法 PD-1蛋白经过预浓缩后,用氨耦联的原理固定于CM5芯片表面,用HBS-EP缓冲液梯度稀释PD-L1蛋白,以20μl/min流速注射到耦联PD-1的传感芯片通道上,结合3 min,解离15 min;观察两者结合情况并用BIA Evaluation软件4进行分析.结果 PD-1在缓冲液的pH值为4.5、浓度为40μg/ml的状态下能稳定耦联于CM5芯片表面,RU值约为3300;稀释度为200 mmol/ml的PD-L1与PD-1能较好地结合,RU值为150,亲和常数为K_D=3.5×10~(-6).结论 经原核表达纯化的PD-1与PD-L1融合蛋白具有较强的特异性亲和力及良好的生物学活性,为下一步研究的开展打下基础.     

1504-siRNA对EphA3表达肿瘤细胞HCT116的抑制作用研究

目的研究原癌基因EphA3的小干扰RNA(small interfering RNA)1504-siRNA对高表达结肠癌细胞HCT116的增殖抑制作用。方法将1504-siRNA质粒用Vigofect转染试剂瞬时转染HCT116细胞,36～48 h后,收集蛋白,用Western印迹检测EphA3及AKT信号通路中的蛋白分子表达,收集细胞,进行噻唑蓝(MTT)实验、平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验。结果 1504-siRNA能抑制HCT116细胞的EphA3蛋白水平,抑制其增殖、平板克隆和软琼脂克隆的形成,抑制pmTOR、p-c-Raf、pAKT、p-4ebp1等信号分子的表达。结论 1504-siRNA抑制HCT116细胞的增殖、存活能力和恶性程度,这可能是通过抑制AKT信号通路来实现,它有望作为肿瘤治疗的候选药物。     

纤溶酶原激活剂的糖基侧链对体内清除率和溶栓活性的影响

tPA和uPA这两类溶栓药物都是糖蛋白,其上的糖基侧链对其半减期和生物活性有一定的影响。它们在体内的清除主要通过肝脏,而肝细胞对它们的识别一部分是通过识别糖基侧链完成的;位于活性中心附近的糖基侧链则会对它们和底物的结合造成一定的空间障碍,从而影响酶的生物活性。     

烟曲霉对唑类药物耐药研究的最新进展

烟曲霉是一种重要的临床致病真菌,可引发致死性霉菌感染。唑类药物是治疗各类曲霉病的临床一线药物。近年来,全世界范围内烟曲霉对唑类药物耐药的报道不断增加,严重影响临床和农药唑类药物使用的有效性,已成为一个重要公共卫生问题。本文主要对烟曲霉唑类药物耐药的流行现状、耐药分子机制、耐药产生的原因、耐药株的进化规律以及防控措施等分别进行介绍。     

Smad3基因剔除小鼠特异性免疫功能的研究

目的　研究Smad3基因剔除小鼠的体液免疫和细胞免疫。方法　采用流式细胞仪对其细胞免疫和体液免疫进行检测 ;并且应用ELISA方法对IgG抗体的吸光度进行测定。结果　纯合型 (- - )小鼠CD8 、CD4 CD8 、IgG雌雄之间差异有显著性 ;CD4 、CD8 、CD3 、CD19 、IgG的值低于野生型 ;结论　CD4 CD8 的比值同野生型比较属于异常 (与人的范围比较 )。因此 ,为在人类免疫疾病研究方面选用该动物提供一定的参考价值     

鼠疫亚单位疫苗的免疫学效果评价

9.10,P<0.01),而豚鼠和兔产生的F1 IgG抗体滴度的差异无统计学意义(q=0.06,P=0.81).亚单位疫苗免疫的小鼠、豚鼠和兔免疫保护率分别为100%(10/10)、86%(12/14)和100%(5/5);EV76疫苗免疫的小鼠、豚鼠和兔免疫保护率分别为100%(6/6)、93%(13/14)和100%(6/6).结论 BALB/c小鼠是较好的评价鼠疫亚单位疫苗的小型动物;豚鼠评价鼠疫亚单位疫苗存在较大个体差异;兔也可用作评价鼠疫亚单位疫苗的动物.     

幽门螺杆菌粘附素基因hpaA的克隆及序列分析

目的：结一株临床分离的高粘附力幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ）菌株进行会素基因ｈｐａＡ的序列分析,为研究Ｈｐ的粘附提供分子基因。方法;设计ｈｐａＡ的特异引物,交去物插入ｐＵＣ１９载体要建ｈｐａＡ的重组克隆,ＤＮＡ自动分析仪进行序列测定,ＣｌｕｓｔａｌＸ和Ｈｏｍｏｌｏｇｙ软件分析ＤＮＡ及其推导出的基酸序列。结果：构建了粘附素ＨｐａＡ的重组质粒ｐＵＣｈｐａ,测充显示ｈｐａＡ结     

1504-siRNA对EphA3表达肿瘤细胞HCT116的抑制作用研究

目的研究原癌基因EphA3的小干扰RNA（small interfering RNA）1504-siRNA对高表达结肠癌细胞HCT116的增殖抑制作用。方法将1504-siRNA质粒用Vigofect转染试剂瞬时转染HCT116细胞,36～48 h后,收集蛋白,用Western印迹检测EphA3及AKT信号通路中的蛋白分子表达,收集细胞,进行噻唑蓝（MTT）实验、平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验。结果 1504-siRNA能抑制HCT116细胞的EphA3蛋白水平,抑制其增殖、平板克隆和软琼脂克隆的形成,抑制pmTOR、p-c-Raf、pAKT、p-4ebp1等信号分子的表达。结论 1504-siRNA抑制HCT116细胞的增殖、存活能力和恶性程度,这可能是通过抑制AKT信号通路来实现,它有望作为肿瘤治疗的候选药物。